9299.net
大学生考试网 让学习变简单
赞助商链接
当前位置:首页 >> 农学 >>

实验一常用培养基的配制

实验一常用培养基的配制


微生物学实验
生命科学实验教学中心510 生命科学实验教学中心510室

实验一 常用培养基配制
实验目的 1. 掌握实验器皿的清洗和包扎方法 2. 掌握常用微生物培养基配制的一般方法和操作步骤 3. 掌握高压灭菌的原理和操作步骤

器皿清洗和包扎 培养基配制 高压蒸汽灭菌

器皿清洗
试管、培养皿、三角瓶、烧杯等玻璃器皿的清洗
用瓶刷或海绵沾上洗衣粉等洗涤剂刷洗, 用瓶刷或海绵沾上洗衣粉等洗涤剂刷洗,然后用自来水充分 冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强, 冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强,可有效地洗去器皿上的油 污。

载玻片与盖玻片的清洗
用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油, 用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油,要先用皱纹纸擦去或 浸在二甲苯内摇晃几次,使油垢溶解,再在肥皂水中煮沸5 浸在二甲苯内摇晃几次,使油垢溶解,再在肥皂水中煮沸5~10 分钟,用软布或脱脂棉花擦试,立即用自来水冲洗, 分钟,用软布或脱脂棉花擦试,立即用自来水冲洗,最后用蒸馏 水换洗数次,待干后浸于95 酒精中保存备用。 95% 水换洗数次,待干后浸于95%酒精中保存备用。使用时在火焰上 烧去酒精。 烧去酒精。

器皿包扎
培养皿的包扎
培养皿常用牛皮纸密密包紧,一般以5 培养皿常用牛皮纸密密包紧,一般以5~8套培养皿作 一包,包好后进行灭菌。 一包,包好后进行灭菌。

试管和三角烧瓶等的包扎
试管和三角瓶盖上铝帽或者塑料帽后用牛皮纸包扎, 试管和三角瓶盖上铝帽或者塑料帽后用牛皮纸包扎,进 行灭菌。包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。 行灭菌。包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。

器皿清洗和包扎小结
微生物学实验室所用的玻璃器皿,大多要进行消毒、 微生物学实验室所用的玻璃器皿,大多要进行消毒、灭菌 和用来培养微生物,因此对其质量、 和用来培养微生物,因此对其质量、洗涤和包扎方法均有一定 的要求。一般来说,玻璃器皿的质量要求硬质玻璃, 的要求。一般来说,玻璃器皿的质量要求硬质玻璃,才能承受 高温和短暂烧灼而不致破损;器皿的游离碱含量要少,否则会 高温和短暂烧灼而不致破损;器皿的游离碱含量要少, 影响培养基的酸碱度;对玻璃器皿的形状和包扎方法的要求, 影响培养基的酸碱度;对玻璃器皿的形状和包扎方法的要求, 以能防止污染杂菌为准;洗涤方法不恰当也会影响实验结果。 以能防止污染杂菌为准;洗涤方法不恰当也会影响实验结果。 因此,在实验准备的时候要严格按照要求洗涤实验器皿。 因此,在实验准备的时候要严格按照要求洗涤实验器皿。包扎 并灭菌后备用。 并灭菌后备用。

培养基配制
培养一般细菌用) 牛肉膏蛋白胨培养基 (培养一般细菌用) 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 3g 10g 5g 15~20g ~ 1000ml

调节pH 至7.2~7.4 调节 ~

实验原理
牛肉膏蛋白胨培养基含有牛肉膏、蛋白胨和 牛肉膏蛋白胨培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。在配制固体培养基时 。 还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化, 还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下 ℃时溶化,在40℃时 ℃ 凝固,通常不被微生物分解利用。 凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质 量和气温的不同而有所不同。 量和气温的不同而有所不同。 培养基要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性 调至中性或微碱性, 培养基要用稀酸或稀碱将其 调至中性或微碱性,以利于细菌的生长 繁殖。 繁殖

实验器材
牛肉膏,蛋白胨, 牛肉膏,蛋白胨, NaCl,琼脂;1mol/L NaOH, 1mol/L HCl;三角瓶, ,琼脂; , ;三角瓶, 烧杯,量筒,玻璃棒,培养皿,电子天平,高压蒸汽灭菌锅, 试纸 试纸( 烧杯,量筒,玻璃棒,培养皿,电子天平,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸( pH 6.4~8.0)等。 )

实验步骤 1.称量 称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入 三角瓶中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量, 三角瓶中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用 热水溶化后倒入三角瓶 琼脂在调节好pH后加入 三角瓶(琼脂在调节好 后加入) 热水溶化后倒入三角瓶 琼脂在调节好 后加入 。

2.溶化 溶化
在上述三角瓶中可加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后, 在上述三角瓶中可加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后, 加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。 加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。

3.调节 调节pH 调节
在未调pH前 先用精密 试纸测量培养基的原始 试纸测量培养基的原始pH值 在未调 前,先用精密pH试纸测量培养基的原始 值,如果 pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入 偏酸, 偏酸 用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌, ,边加边搅拌, 并随时用pH试纸测其 试纸测其pH值 直至pH达 2 并随时用 试纸测其 值,直至 达7.2~7.4。反之,则用 。反之, 1mol/L HCl进行调节。 进行调节。 进行调节

4.灭菌 灭菌
将上述培养基以121℃, 20分钟高压蒸汽灭菌。 ℃ 分钟高压蒸汽灭菌。 将上述培养基以 分钟高压蒸汽灭菌

5.倒板 倒板
将灭菌后的培养基冷至50℃左右,取出高压过的培养皿, 将灭菌后的培养基冷至 ℃左右,取出高压过的培养皿,制 备牛肉膏蛋白胨培养基固体平板 。

培养基配制小结

值不要调过头, 注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基 值不要调过头 以避免回调,否则, 内各离子的浓度。 内各离子的浓度。

高压蒸汽灭菌原理
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌 锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水 蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀, 蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀, 继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌锅内的压力, 继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌锅内的压力, 从而使沸点增高,得到高于 从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固 ℃的温度。 变性而达到灭菌的目的。 变性而达到灭菌的目的。

高压蒸汽灭菌方法
1. 将灭菌篮取出,再向锅内加入适量的水,使水面与底孔相平为 将灭菌篮取出,再向锅内加入适量的水, 宜。 2. 放回灭菌篮,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防 放回灭菌篮,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤, 碍蒸汽流通而影响灭菌效果。 碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与壁面 接触。 接触。 3. 关闭高压锅盖排气阀,设定工作状态,本实验用 121℃,20分 关闭高压锅盖排气阀,设定工作状态, ℃ 分 钟灭菌。 钟灭菌。

4.灭菌所需时间到后,当压力表的压力降至0时,打开排气阀,旋 灭菌所需时间到后,当压力表的压力降至 时 打开排气阀, 灭菌所需时间到后 松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果压力未降到 时 松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果压力未降到0时,打开排气 就会因锅内压力突然下降, 阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不 平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成管塞沾染培养基而发生污染。 平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成管塞沾染培养基而发生污染。 5. 将取出的液体灭菌培养基放入 ℃保存,如果是制备固体培养基平 将取出的液体灭菌培养基放入4℃保存, 板则要待固体培养基温度降至50℃左右制备平板, 板则要待固体培养基温度降至 ℃左右制备平板,固体培养基平板 也放4℃保存。 也放 ℃保存。

实验思考
1.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 1.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 培养微生物的培养基应具备哪些条件 2.培养基配好后,为什么必须立即灭菌? 2.培养基配好后,为什么必须立即灭菌?如何检查 培养基配好后 灭菌后的培养基是无菌的? 灭菌后的培养基是无菌的?



推荐相关:
网站首页 | 网站地图
All rights reserved Powered by 大学生考试网 9299.net
文档资料库内容来自网络,如有侵犯请联系客服。zhit325@qq.com