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蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法

蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法


蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法 (除韭菜外) 果菜类 豆菜类 瓜菜类 根 菜; 1 范围: 本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残毒快速检 测方法。 本标准适用于叶菜类叶菜类(除韭菜外)果菜类 豆菜类 瓜菜类 根菜类(除胡萝卜 茭 白) 中甲胺磷 氧化乐果 对硫磷 甲拌磷 久效磷 倍硫磷 杀扑磷 敌敌畏 克百威 涕灭威 灭 多威 抗蚜威 丁硫克百威 甲萘威 丙硫克百威 速灭威 残杀威 异丙威等的农药残毒的快速 检测。 2 原理: 有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性, 造 成神经传导介质乙酰胆碱的积累,影响正常传导,使昆虫中毒死亡,根据这一昆虫毒理学原 理, 用在对农药残留的检测中。 加入反应试剂后, 用分光光度计测定吸光值随时间的变化值, 计算出抑制率,判断蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的残毒情况。即: 乙酰胆碱酯酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药→酶活性被抑制 →活性被抑制→样本中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药 乙酰胆碱酯酶+样本提取液︱→ →活性正常→样本中不含有有机磷或氨基甲酸酯类农 如以乙酰硫代胆碱(AChE)为底物,在乙酰胆碱酯酶(AChE)的作用下乙酰硫代胆碱(AsCh) 水解成硫代胆碱和乙酸,硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸(DTNB)产生显色反应,使反应液 呈黄色,在分光光度计 410 纳处有最大吸收峰,用分光光度计可测的酶活性被抑制程度(用 抑制率表示) 。 3 试剂: 3.1 磷酸缓冲液。 3.2 丁酰胆碱酯酶:根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解,⊿A 值控制在 0.4~0.8 之间。 3.3 底物典化硫代丁酰胆碱,用缓冲液溶解。 3.4 显色济:二硫代二硝基甲酸,用缓冲液溶解。 4 仪器: 4.1 波长为 410 纳米±3 纳米专用测速仪,或用可见光分光度计. 4.2 电子天平(准确度 0.1 克). 4.3 微型样品混合器. 4.4 台式培养箱 4.5 可调移液枪: (10~100 微升,1~5 毫升). 4.6 不锈钢取样器(内径 2 厘米). 4.7 配套玻璃仪器及其他配件等. 5 检测 5.1 取样 用不锈钢管取样器取来自不同植株叶片(至少八~十片叶子)的样本;果皮从表皮到果肉 1-1.5 厘米处取样. 5.2 检测过程 取两克切碎的样本(非叶菜类取 4 克),放入提取瓶内,加入 20 毫升缓冲液震荡一到两分钟, 倒出提取液,静止 3-5 分钟;于小试管内分别加入五十微升酶,3 毫升样本提取液,50 微升显色 剂,于 37~38℃下放置 30 分钟后再分别加入 50 微升底物,倒入比色杯中,用仪器进行测定.

5.3 检测结果计算 检测结果按式(1)计算 抑 制 率 (%)= ﹝ △ Α C- △ Α s ﹞ / △ Α c × 100 (1) 式中 △ΑC——对照组三分钟后与三分钟前吸光值之差; △ Αs——样本三分钟后与三分钟前吸光值之差. 抑制率≥70%时,蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒.此时样本要有 2 次 以上重复检测,几次重复检测的重现性应在 80%以上. 6 最低检出浓度 本方法的最低检出浓度见表 1。

农药中文名 甲胺磷 氧化乐果 对硫磷 甲拌磷 倍硫磷 久效磷 杀扑磷 敌敌畏 克百威 涕灭威 灭多威 抗蚜威 丁硫克威 甲萘威 丙硫克百威 速灭威 残杀威 异丙威

毒性 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 高毒 中毒 中毒 中毒 中毒 中毒 中毒

最低检出浓度(溶液)毫克/升 1~2 0.7~2 0.7~1.5 0.3~0.7 2~2.5 0.3~0.7 2~2.5 0.1 0.3~0.7 0.3~0.7 0.3~0.7 0.5~1 0.7~1 0.3~0.7 0.3~0.7 0.5~0.8 0.3~0.8 0.5~0.8

最低检出浓度 (蔬菜) 毫克/千克 3~5 2~5 2~4 1~2 6~7 1~2 6~7 0.3 1~2 1~2 1~2 1.5~3 2~3 1~2 1~2 1.5~2.5 1.5~2.5 1.5~2.5

丁酰胆碱酶对甲基对硫磷 乐果 毒死蜱 二嗪磷等农药不太灵敏,检出浓度均在 10 毫升 |千克以上。 实验= 植物抗逆性的鉴定——电导仪法 植物抗逆性研究,在植物生理生态研究中有一定重要性,与生产关系也很密切,因此常要 求对植物抗逆性进行坚定.该实验练习根据电导率变化来测定细胞透性变化(透性变化能反 映抗逆性大小)的技术,并观察干旱,高温等因子对细胞透性的影响,为深入开展抗逆性研究 提供条件 —,原理 当植物组织受干旱或其他不良条件如高温,低温等影响时,常能伤害原生质体的结构而引 起透性增大,结果细胞内含物将有不同程度的外渗,使外渗液的电导度增大,用电导仪即可明 显的测定出来;透性变化愈大,抗性欲弱.

二,材料与设备 (1) 植物材料:植物叶片 (2) 仪器与用具:电导仪,万分之一天平,温箱,真空泵,真空干燥器一个,恒温水浴锅一 个,50ml 烧杯 10 个,100ml 量瓶 6 个,1000ml 一个,玻璃蒸馏器或离子交换纯水器一 套,玻棒十根,滤纸若干,洗瓶一个,解剖剪一把. (3) 试剂 ① 重蒸馏水或无离子水; ② 100 氯化钠标准溶液:取分析纯氯花钠 100mg,先溶于少量无离子水或重蒸馏水中,用 1000ml 量瓶定容并摇匀; ③ 硫酸-重铬酸钾洗涤液适量. 三,方法 1,清洗用具 由于电导变化极为灵敏,稍有杂质即产生很大误差,故清洗用具是重要步骤.所以玻璃用 具均须先用肥皂洗,再用新配洗涤液洗,然后用自来水,无离子水(或重蒸馏水)各洗四五 遍(最后容器向下用水冲),最后倒置于洗净而垫有洁净率纸的盘中,上用洁净纱布或玻 璃板覆盖.需要干的可用烘干箱烘干 2.作标准曲线 如需要定量测定透性变化,可用分析纯 NaCl 配成 0.10.20.40.60.80.100 的标准液,在 20-25℃恒温下用电导仪测定,记录读书,并制作标准曲线.如只须定性,则制作标准曲线 这一步可以省去.


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