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实验二不良环境对植物细胞膜的伤害

实验二不良环境对植物细胞膜的伤害

实验二 不良环境对植物细胞膜的伤害
一、原理 植物组织在受到各种不利的环境条件(如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染)危害时,细胞膜的结构和 功能首先受到伤害,细胞膜透性增大。若将受伤害的组织浸入无离子水中,其外渗液中电解质的含量比正 常组织外渗液中含量增加,组织受伤害越严重,电解质含量增加越多。用电导仪测定外渗液电导率的变化, 可反映出质膜受伤害的程度。在电解质外渗透的同时,细胞内可溶性有机物也随之渗出,引起外渗液可溶 性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加,氨基酸和核苷酸对紫外光有吸收,对紫外分光光度计测定受伤害组织 外渗液消光值,同样可反映出质膜受伤害的程度。用电导仪法和紫外法测定结果有很好的一致性。 二、材料与仪器设备 1、仪器设备 ⑴DDS—11A 型电导仪法; ⑵751—型紫外分光光度计; ⑶真空泵; ⑷真空干燥器; ⑸三用水浴; ⑹打孔器 ⑺剪刀; ⑻洗瓶; ⑼试管; ⑽移液管; ⑾玻棒; ⑿滤纸 2、试剂 去离子水 3、材料 低温处理过的黄瓜、番茄 三、方法步骤 1、清洗器具:由于电导仪变化非常灵敏,稍有杂质即产生很大误差。因此所用玻璃器具均需先用热肥皂水 洗,再用洗液洗涤,然后用自来水、无离子水各冲四到五遍(最好是容器口朝下用水冲) 。向洗净的试管中 加入去离子水,用电导仪测定电导值,检查试管是否确实冼净。 2、取样及处理 选取果品,一份放入适温下贮藏,另一份放入过低温度下使其受冷害,作为处理。用打孔器及切片器将样 品制成厚薄均匀,大小一致的组织圆片,精确称取 2 克(或 10 个圆片) ,放入试管内,用去离子水冲洗三 次,然后加入 30ml 去离子水。对照和处理均设 3~4 个重复。 将试管放入真空干燥器内,开动真空泵抽气 10min,以抽出细胞间隙空气。缓慢放入空气,水即渗入细胞 间隙, 组织圆片变成透明状, 细胞内溶质易于渗出, 取出试管, 间隔几分钟振荡一次, 在室温下保持 30min。 3、测定:将 DDS—11A 型电导仪电极插入试管,测定外渗液的电导值。测定之后,将试管放入水浴锅沸 水中 5min 以杀死组织。待冷至室温后,再次测定外渗液的电导值。 4、计算: (1)以细胞膜相对透性大小表示细胞受害的程度。通常按下式计算: 细胞膜相对透性(%)= L1/L2×100 式中:L1:组织杀死前外渗液的电导值;L2 组织杀死后外渗液的电导值。 (2)直接计算细胞膜伤害率,通常采用下式计算:

式中:C1:对照组织杀死前外渗液的电导值;C2:对照组织杀死后外渗液的电导值;T1:处理组织杀死前 外渗液的电导值;T2 处理组织杀死后外渗液的电导值。

附电导仪使用方法: (1)将电极引线接到仪器相应接线柱上。 (2)接上稳压器,接通电源,打开电源开关。 (3)将开关拨向“校正”位置,调整调节器,使指针达到满偏。 (4)将开关拨向“测定”位置。指针应回到 0 点。 (5)拨动选择测定范围旋钮,使其处于测定范围之内,如不知测量范围,应先放在最大量程位置上,由大 到小逐级调整。 (6)将电极用量蒸馏水冲洗干净,并用滤纸吸去附着的水分。放在需测组织提取液中,待指针稳定后,读 出指针所指数值,此数值即该提取液的电导度。 (7)按上述方法测定组织圆片杀死后提取液电导度。 (8)将电极用蒸馏水冲洗干净,放在水中,如长期不用,则应将电极洗净晾干包装收藏。 注意事项:电导率测定的整个过程均需在恒温下进行,因为温度不仅影响细胞内离子内外渗透速度,而且 影响提取的电导率,一般每升高 1℃,电导率约增加 2%,通常以 25℃为标准温度,如不在 25℃下测定, 则要求把电导率换算为标准温度 25℃的电导率


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