9299.net
大学生考试网 让学习变简单
当前位置:首页 >> 农学 >>

全自动毛细管核酸分析系统

全自动毛细管核酸分析系统


HDA-GT12TM 全自动毛细管核酸分析系统

培训手册 DNA 版

基因有限公司生命科学组
2008 年 1 月

基因有限公司





一、 二、 三、 四、 五、 六、 七、

HDA-GT12TM 全自动毛细管核酸分析系统简介-------------2 HDA-GT12TM 全自动毛细管核酸分析系统安装和维护----3 Gel Cartridege 凝胶卡夹的安装及背景校正-----------------4 培训所需试剂、仪器及耗材-------------------------------------10 DNA 样品演示实验------------------------------------------------11 BioCalculatorTM 软件基本功能及数据分析-------------------12 常见问题解答--------------------------------------------------------20

1

基因有限公司

全自动毛细管核酸分析 毛细管核酸分析系统介绍 一.HDA-GT12TM 全自动毛细管核酸分析系统介绍

eGene 是位于美国加州的一个新兴的生物技术公司,其主打产品是 HDA-GT12TM,用 于高通量 DNA/RNA 分离分析, 该产品广泛用于遗传分析, 疾病检测以及食品鉴定等方面。 相比其它同类产品,其特点是高通量、低消耗、自动化、安全化、标准化。

(一)产品介绍: 产品介绍:
技术参数: 1. 自动加样 2. 高通量 3. 无需制胶 4. 快速分析 5. 高灵敏度 6. 高分辨率 7. 数据显示 8. 体积小 9. 安全 10. 重量 自动化加样; 每次可分析 96 个样品; 即开即用凝胶卡夹,4、8、12 通道可选; 1-1.3 小时/96 个样品; PCR 产物检测最低 DNA 浓度为 0.1ng/ul; 500bp 以下达 2-5 个 bp; 电泳图谱和峰图 便于搬运; 无敞开式 EB 污染; 23kg

(二)BioCalculatorTM 软件
1.操作简单,多种内嵌式方法模板适用各种用途 2.数据分析界面友好:既可用于定性分析也可用于定量分析,一次完成多组数据分析 3.数字化实验数据采集: 实验数据以电泳峰图和胶图两种形式显示 可适时浏览电泳峰图和胶图 电子化实验数据方便储存和传递

2

基因有限公司

二.HDA-GT12TM 全自动毛细管核酸分析系统安装和维护

(一)安装条件
1.位置要求:稳定水平的操作平台放置仪器,远离震荡设备。 2.温度要求:常温 3.湿度要求:40%-95% 4.电源:100-230V~, 50-60 Hz, 360W (VA) 5.电脑要求:
Processor处理器: Pentium IV 1.8 或更高 硬盘: 40GB 内存: 512 MB RAM 显示器: 800x600 操作系统:Microsoft Windows XP

(二)维护
用湿布清洁仪器的外表面。不能灭菌,不需要用化学物质清洁仪器外表面,否则可能 会引起表面损坏。如果矿物油偶尔滴在样品支架或溢出到样品支架时,用热水和肥皂水清 洗(和新卡夹第一次使用时清洗的过程相同) 。凝胶卡夹的储存温度推荐为 15℃-25℃, 相对湿度为 40%-95%。

3

基因有限公司

凝胶卡夹的安装及背景校正 安装及背景 三.Gel Cartridege 凝胶卡夹的安装及背景校正

(一)凝胶卡夹的安装
1. 用温和的去污剂清洗盛溶液的试剂槽,然后用去离子水彻底冲洗干净 2. 分别加 8ml 的 DNA Washing Solution 到盛溶液的试剂槽的 WP 和 WI 槽 3. 加 16ml 的 Separation Buffer Solution 到盛溶液的试剂槽的 BUF 槽 4. 然后加 2ml 的矿物油到 WP 和 WI 槽,加 4ml 的矿物油到 BUF 槽,防止洗液和分离 液挥发(图 1)

图1

5. 加 15ul 的 Alignment Marker 到 0.2ml 的连管中,每孔加一滴矿物油,然后插入到盛 溶液的试剂槽的 MARKER1 的位置(图 2) 6. 加 15ul 的 Intensity Calibration Marker 到彩色的 0.2ml 的连管中,然后插入到盛溶液 的试剂槽的 MARKER2 的位置(图 2)

图2

4

基因有限公司

7. 点击<Instrument Control>上的<Change Buffer>按钮,仔细将盛满溶液的试剂槽放到 仪器的对应支架上 8. 去掉凝胶卡夹后面的封胶带,打开仪器上的卡夹门,将凝胶卡夹正面朝前插入仪器卡 夹内,凝胶卡夹上的加密钥匙插入仪器相应的适配器中,关上卡夹门,凝胶卡夹的 ID 号将会在仪器的控制面板上显示(图 3) 。

图3

注意: 注意:
A. 使用过的Alignment Marker的四联管在仪器未运行时,应置于-20°C保存,再次使 用时,应先室温平衡并离心。 B. C. 建议运行 15-20 次或隔 3 天,更换新的 Alignment Marker。 确保联管放置比较宽松,如果太紧,可能导致上样出现问题,严重的甚至可能导 致毛细管损坏。

5

基因有限公司

(二)凝胶卡夹通道的背景校正 凝胶卡夹通道的

1. 双击

快捷图标,进入软件操作,在<File>下选中<Intensity Calibration>(图 4)

图4 2.此时弹出 Intensity Calibration 对话框,点击 start 运行程序(图 5 A)

图5 3.之后,仪器会自动完成卡夹的自检、2 次背景校正程序(图 6)及背景校正的验证程序 (图 7)

6

基因有限公司

图6

7

基因有限公司

图7

图7 4.程序结束后,软件会自动弹出校正结果界面(图 8)

8

基因有限公司

图8 背景校正程序结束后, 会在图 8 的对话框中显示每一个泳道的校正情况, “Pass” 或者 或者是“Fail” 。注意:正常的校正数值范围是:0.004-0.006。 如果校正没有通过,即校正数值不在 0.004-0.006 范围内,则需要进行重新校正。 重新校正的程序如下: 1).更换新的背景校正 marker 2).点击 Recalibrate 按钮,图 9

图9 3).点击 Start,重新进行背景校正程序,图 10

9

基因有限公司

图 10

四.培训所需试剂、仪器及耗材 培训所需试剂、

(一)试剂
1.DNA Gel Cartridge(GC-5000-4) 2.TE Buffer( PH=8.0)

(二)仪器及耗材
1.台式离心机 2.移液器 3.0.2 ml PCR 反应管,Tip 头,手套等

以上物品请用户提前准备妥当,我公司培训人员将使用以上物品进行仪器使用的培 训工作。如不具备请及时与培训技术人员联系。

10

基因有限公司

样品演示 演示实验 五.DNA 样品演示实验
(一)样品准备
PCR 样品 提示:有些 PCR 的反应 kit 盐的含量过高,用 PH8.0 的 TE 稀释能得到更好的结果

(二)实验操作步骤

1.双击

快捷图标,进入软件操作,在<File>下选中<Instrument Control>

2.点击<Change Buffer>按钮,将加有样品的 PCR 管(或 96 孔板)放在仪器 96 孔板载 物台上,最少上样体积 10ul 3.选择合适的分离方法,如:OM500(图 12 A) 4.输入样品类型、位置和分离重复次数(图 12 B) 5.点击<Sample info>按钮,输入和样品孔对应的样品名称(图 12 F) 6.确认所用到的通道均已选中(图 12 G) 7.检查仪器的状态,Pres1:OK ;Pres2:OK;SD:Closed;CD:Closed。 8.当仪器状态为“图 7”中所示时,点击<Run>,运行程序(图 12 J)

11

基因有限公司

图 12

软件基本功能及数据分析 六.BioculatorTM 软件基本功能及数据分析
(一)软件的基本功能

12

基因有限公司

图 13 Instument Control 显示仪器的程序编辑界面,列出了仪器所有的功能 显示当前凝胶卡夹可以使用的方法 命名分离样品的类型 分离样品的位置 仪器的上样时间,可以在 0-60s 之间选择 分离样品的重复次数或排数 如果选中,仪器将自动从 A 行上样,依次到B、C、D、E、F、G 和 H 行 输入和样品孔对应的每个样品的名字 锁住仪器内的凝胶卡夹 更换仪器内的凝胶卡夹
13

基因有限公司

定位凝胶卡夹到盛溶液的试剂槽的 WP 槽 移动盛溶液的试剂槽和支架,方便更换溶液和放置样品 调用分离实验中使用的 Reference marker

(二)软件数据分析
1.实验运行结束后,打开<Analysis>,点击<Parameter>(图 14)

图 14 2.检查<First peak>和<Last peak>已经打“√” ,作为默认设置。然后点击<OK>(图 15)

图 15 3.打开<Analysis>,点击<Run> 4.以 Alignment marker 条带为标准,进行泳道之间的均一化校正(图 16) 。

14

基因有限公司

图 16 5.确定 DNA 样品的大小和浓度 (1)双击 Marker 通道上面的彩色条带或直接在界面下方打开 Marker 泳道的数据界面, 放大实验结果,确认所有的峰均在对照阈值之上 (2)打开<Analysis>,点击<Reference Markers>,然后点击<Open>,显示 eGene 内 置的 Reference Markers 列表。 选中目的 Marker, 显示目的 Marker 的条带 (图 17)

图 17
15

基因有限公司

(3)输入第一条和最后一条 Alignment marker 的大小,如第一条为 15pb,最后一条为 5000bp(图 18,图 19) 。

图 18

图 19 (4) 点击<copy>按钮, 将结果图表中的 “Reltime” “NA” 的数据复制到 reference marker 图表中对应的位置(图 20) 。

16

基因有限公司

图 20 (5) 点击<save>, 结合 marker 名字和实验方法重新命名 reference marker, 点击<Save> 按钮(图 21)

图 21 (6) 打开<Analysis>, 点击<Run>, 条带的大小和浓度出现在实验结果的图表上 (图 22) 。

17

基因有限公司

图 22

(三)数据输出
1. 数据分析完成后,关闭分析窗口并保存相关数据。 选择<File>,点击<Export>按钮(图 23) 。

2.

图 23

3.显示 96 孔板图像创建面板(图 24)

18

基因有限公司

图 24

4. 点击<Plate>目录下<Select>按钮,选择需要分析的数据保存的文件夹 5. 点击<Image/Result file name>目录下<Select>按钮,选择图像将要保存的文件夹 6. 在<File to process>窗口,选择需要分析的样品数量;全选,单击<Select All>按钮 7. 在<Property>窗口,选择图像显示的内容,如 size、concentration、name 等 8. 在<Image Fomat>选择图像的排列方式、分辨率和保存格式 9. 点击<Process>按钮。要查看输出的报告,直接进入图像保存的文件夹即可(图 25) 。

19

基因有限公司

图 25

20

基因有限公司

七.常见问题解答
Q:仪器不能打开? A:1.检查电源是否连接好 2.保险丝断了,更换保险丝 Q:仪器不能运行? A:1.检查样品门和卡夹门是否关闭 2.没有检测到凝胶卡夹的加密钥匙 3.氮气瓶压力太低 4.USB 软件 key 丢失或破裂,重连 USB 软件 key 或更换 key Q:某些通道的峰迁移慢? A:通道中有气泡,用 Purge 方法去除气泡或更换分离 buffer。 Q:不同通道之间 Calibration marker 的信号有差异? A:检查新的凝胶卡夹是否进行校正 Q:Alignment marker 信号太弱? A:Alignment marker 降解,更换 marker Q:运行时不产生信号? A:1.样品的体积太少,最少 10ul 2.毛细管堵塞,用 Purge 的方法疏通毛细管,如果不行,更换凝胶卡夹 Q:电泳条带太宽? A:1.DNA 样品浓度太高,TE buffer 稀释样品,或减少上样的时间,或选用高浓度分离 方法(OH500) 2.通道破裂产生高背景,更好凝胶卡夹 Q:DNA 信号太低? A:1.DNA 样品浓度太低,增加上样的时间,或选用低浓度分离方法(OL500) 2.样品盐浓度太高,去盐或稀释样品

21


推荐相关:
网站首页 | 网站地图
All rights reserved Powered by 大学生考试网 9299.net
文档资料库内容来自网络,如有侵犯请联系客服。zhit325@qq.com